Secuencia, expresión de alto nivel y purificación de una proteína recombinante de 21 kDa de Cowdria ruminantium a partir de Escherichia coli

Resumen

El objetivo de nuestro proyecto es el de proveer una fuente proteica conveniente, barata y pura, para ser utilizada en vacunas y ensayos dianósticos de Cowdria ruminantium. Se llevó a cabo una secuencia de ADN de inserción, proveniente de una colonia de E. coli F5.2 recombinante, con expresion de una proteína inmunodominante de Cowdria ruminantium. Este ADN era rico en AT (74 p. 100), híbrido para todos los aislamientos de C. ruminantium que se probaron, pero no para ADN bovino o de Anaplasma marginale y era portador de dos marcos de lectura prolongada (ORFs) de dos pares de base de 627 y 831. Los ORFs fueron enriquecidos con GC (en comparación con la composición de base general) y ambos codificaron potencialmente proteínas portadoras de un péptido de señal N-terminal. Los experimentos de supresión, seguidos de ensayos de expresión, sugieren que el ORF de 627 codifica la proteína inmunodominante de C. ruminantium reconocida en los sueros infectados. Se amplificó el ORF de este polipéptido maduro y se unió a un vector de expresión de alto nivel, en el cual se expresó como una proteína de fusión. El péptido de fusión, resultado de la unión de 9 amino ácidos, permitió una rápida purificación de la proteína recombinante de C. ruminantium.