Caracterización parcial y clonaje del gen Cr32 de Cowdria ruminantium

Resumen

Se purificaron organismos de Cowdria mediante centrifugación de gradiente de densidad. Para la construcción de los libreros de expresión se uso ADN. La proteína inmunodominante Cr32 se purificó y se determinó la secuencia del amino ácido N terminal. La expresión de los libreros se monitoreó con anticuerpos monoclonales específicos para Cr32, pero no se produjeron clones Cr32-positivos. Sin embargo, una parte del gen Cr32 se amplificó, gracias al uso de “primers” derivados de la secuencia del amino ácido N terminal y del amino ácido interno. Este ADN se utilizó como agente probador para la detección del fragmento codificador de ADN del genoma de la proteína Cr32. Este fragmento se sometió a un clonaje, mediante el uso de ADN genómico de la cepa Senegal de Cowdria ruminantium. Una parte del gen, que comprende dos terceras partes de su longitud total se exprimió en el vector pGEX2T. Este producto es reconocido mediante anticuerpos monoclonales específicos para Cr32.