Obtention et culture de protoplastes pour la régénération de bananiers par embryogenèse somatique

Résumé

Introduction. Le protocole décrit une méthode qui permet d'obtenir des protoplastes à partir de feuilles, de cals et de suspensions cellulaires de bananiers, ainsi que le développement, par embryogenèse somatique, des protoplastes issus de suspensions cellulaires embryogènes. Le principe, les principaux avantages de la méthode, le matériel végétal de départ, le temps nécessaire et les résultats attendus sont présentés. Matériel et méthodes. Cette partie décrit le matériel de laboratoire nécessaire, la préparation des milieux pour l'obtention de protoplastes, ainsi que leur culture. Résultats. Dès la première demi-heure d'incubation dans la solution enzymatique, les premiers protoplastes sont libérés. En 12 semaines, les protoplastes, issus de suspensions cellulaires embryogènes, se développent en plantes entières via l'embryogenèse somatique. Sur les couches nourricières, les protoplastes reconstituent leur paroi ; les premières divisions cellulaires s'observent (3 à 8) jours après l'étalement des protoplastes. La formation des proembryons se déroule entre (14 et 21) jours après le début des cultures de protoplastes. Puis, (8 à 10) semaines après l'étalement des protoplastes, leur évolution embryogène conduit à des plantules qui s'enracinent et s'allongent après transfert sur un milieu dépourvu de facteurs de croissance.