Diagnostic sensible de la tristeza des agrumes par immunocapture (IC) suivie de transcriptase inverse et amplification en chaîne de la polymérase (RT- PCR) et hydrolyse enzymatique de sondes fluorescentes

Résumé

Dans ces travaux, une technique de diagnostic du CTV (virus de la Tristeza des agrumes), basée sur la méthode IC/RT-PCR, est présentée. Elle combine la simplicité du test Elisa avec les avantages de méthodes utilisant le DNA. Des échantillons infectés par des isolats de CTV de diverses origines ont été collectés. Les amorces et les sondes fluorescentes ont été choisies en se basant sur la séquence du gène codant pour la protéine de l'enveloppe du CTV de race T36, de Floride. Une méthode IC/RT-PCR simplifiée a été élaborée. Après amplification par PCR, l'analyse electrophorétique des résultats a été substituée par la mesure de la fluorescence. Les résultats obtenus avec cette technique ont été comparés avec ceux du test Elisa utilisé en parallèle sur les mêmes échantillons. La technique PCR a permis de détecter des virus non seulement dans tous les échantillons Elisa-positifs, mais encore dans 20% de ceux trouvés Elisa-négatifs. La méthode testée, plus sensible que le test Elisa, s'avère un meilleur outil de détection de la maladie