Clonage et caractérisation partielle du gène codant pour la protéine Cr32 de Cowdria ruminantium

Résumé

Les Cowdria ont été purifiées par centrifugation en gradient de densité. L'ADN a été utilisé pour la construction de banques génomiques d'expression. La protéine immunodominante Cr32 a été purifiée et la séquence N-terminale d'acides aminés déterminée. Les banques génomiques d'expression ont été criblées avec des anticorps monoclonaux spécifiques de la protéine Cr32, mais aucun n'a réagi. Une partie du gène codant pour la Cr32 a ensuite été amplifiée utilisant des amorces provenant de la séquence N-terminale et d'une autre séquence d'acides aminés interne. La séquence amplifiée a servi de sonde pour détecter le fragment d'ADN génomique codant pour la protéine Cr32. Ce fragment, provenant du stock Sénégal de Cowdria ruminantium, a alors été cloné. Une partie du gène, représentant les deux tiers de la longueur totale, a été exprimée dans le vecteur pGEX2T. Le produit d'expression obtenu est reconnu par les anticorps monoclonaux spécifiques de la Cr32.